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倒置荧光显微镜功能简介以及使用须知

更新时间:2022-11-22   点击次数:946次
  首先,先让我们一起来看看荧光显微成像技术的发展,所谓荧光,指的是当分子受到光激发时,电子从基态跃迁到不稳定状态的激发态,电子从第一激发单重态的低振动能级回到基态并发出辐射的光,一般而言,荧光光谱主要包括两种,一种是激发谱,而另外一种则是发射谱,其中激发谱是荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况,即不同波长的激发光的相对效率,而发射谱是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况,即荧光中不同波长的光成分的相对强度。
 
  受到光激发的分子,电子从基态跃迁到激发态,电子在吸收光的能量后,可能到达第一激发态的高振动能级或第二激发态,这个时候电子会经历内转换或驰豫振荡过程到达第一激发态的低振动能级。由于激发态是不稳定状态,电子从第一激发单重态的低振动能级回到基态并发出辐射。
 
DSY5000X倒置荧光显微镜
 
  倒置荧光显微镜是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成,是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
 
  以徕卡显微镜为例,倒置荧光显微镜也是光学显微镜的一种,主要区别是二者的激发波长不同,由此决定了倒置荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
 
  1、照明方式通常为落射式,即光源通过物镜投射于样品上;
 
  2、光源为紫外光,波长较短,分辨力率高于普通显微镜;
 
  3、有两个特殊的滤光片,光源前的用以滤除可见光,目镜和物镜之间的用于滤除紫外线,用以保护人眼。


 
  倒置荧光显微镜使用过程中的注意事项:
 
  1、严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
 
  2、应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛适应暗室,再开始观察标本。
 
  3、防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。
 
  4、检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,最多不得超过2~3h。
 
  5、荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
 
  6、标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。长时间的激发光照射标本,会使得荧光衰减和消失现象,故应尽可能缩短照射时间。暂时不观察时可用挡光板遮盖激发光。
 
  7、标本观察时候应采用无荧光油,应避免眼睛直视紫外光源。
 
  8、电源应安装稳压器,电压不稳会降低荧光灯的寿命。
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